Terapiyadagi antikor fragmentlari. Antikorning fab fragmenti. To'liq antikorlar. To'liq bo'lmagan antikorlar. Antikorning Fc fragmenti Ma'lumotnomalar, video ma'ruzalar, protokollar

Antikorlar (Ab) gumoral immunitetning effektor molekulalaridir. Antikorlarning sintezi organizmga tashqaridan (infektsiyalar, emlash, ksenobiotiklar ta'sirida) yoki endogen tarzda hosil bo'lgan Ags tomonidan qo'zg'atiladi. Qoida tariqasida, AT to'ldiruvchi Ag bilan maxsus o'zaro ta'sir qiladi. Biroq, turli Aglar uchun umumiy bo'lgan Ag determinantlari bilan o'zaro ta'sir qiluvchi antikorlar mavjud. Bunday antikorlar deb nomlanadi o'zaro reaksiyaga kirishuvchi yoki geterospesifik.

Antikorlar millionlab navlarda bo'ladi va har bir molekulada o'ziga xos antigen determinant bog'lanish joyi mavjud. Aksariyat hollarda antikorlar taqdim etiladi sarum glikoproteinlari, sarum oqsillarining elektroforezi paytida gamma globulinlarning sekin fraktsiyasining bir qismi sifatida migratsiya. Shuning uchun "gamma" atamasi ba'zan sarum AT fraktsiyasini belgilash uchun ishlatiladi. - globulinlar».

Antikorlar ham deyiladi immunoglobulinlar". Antikorlar (Ab) qon oqsillarining asosiy fraktsiyalaridan birini tashkil qiladi, massaning 20% ​​ni tashkil qiladi. umumiy protein plazma. AT zaif kislotalar va ishqorlarga, shuningdek, 60 ° C gacha qizdirishga chidamli.

AT ning strukturaviy birligi monomer - ikkita bir xil og'ir H-zanjirlaridan tashkil topgan silindrsimon molekuladir [ingliz tilidan. og'ir, og'ir] va ikkita bir xil engil L-zanjirlar [ingliz tilidan. yorug'lik] Ig ning og'ir va engil zanjirlari aminokislotalar qoldiqlaridan iborat bo'lib, ular disulfid (-S-S-) bog'lari bilan bog'langan. Zanjirlarda o'zgaruvchan mintaqa yoki V-mintaqasi ajralib turadi. turli, turli] va doimiy mintaqa yoki C-mintaqasi [ingliz tilidan. doimiy, doimiy]. V hududi ATlar orasida farq qiladi. L va H zanjirlarining V-hududlari Ag-bog'lash markazini (AT faol markaz, paratop) yoki Fab fragmentini [ingliz tilidan. fragment fragmenti, + antigen bog'lovchi, bog'lovchi Ag]. Molekulaning doimiy hududi Fc fragmenti deyiladi. fragment kristallanadi, kristallanish parchasi].

Fab va Fc fragmentlarining tutashgan joyida menteşe mintaqasi mavjud bo'lib, u Ag-bog'lovchi fragmentlarni ko'proq ochishga imkon beradi. yaqin aloqa : yaqin kontakt Ag bilan.

Antikor molekulasi (Fab) hududi antigenning o'ziga xosligini aniqlaydi va Fc effektor funktsiyalarini bajaradi.

Antikorlarning fab bo'laklari antijenik determinantlar bilan o'zaro ta'sir qiladi. Ag-bog'lash markazi Ag epitopini to'ldiradi (kalitlarni qulflash printsipi). Ag ning AT bilan bog'lanishi kovalent emas va teskari. Ag ning antikorga yaqinligi (yaqinligi) o'zaro ta'sir qiluvchi molekulalarning fizik-kimyoviy xususiyatlari va bog'langan va erkin Ag va antikorlar kontsentratsiyasining nisbati bilan belgilanadi. Yaqinlikka molekulalarning o'zaro ta'sir qiluvchi mintaqalarining fazoviy mosligi, elektrostatik, hidrofobik o'zaro ta'sirlar va Van der Vaals kuchlari ta'sir qiladi.

Avidlik- barcha faol markazlarning Ag epitoplari bilan o'zaro ta'sirini hisobga olgan holda Ag va AT o'rtasidagi bog'lanish kuchining integral xarakteristikasi.

Antikor valentligi- faol (Ag-bog'lovchi) antikor markazlari soni. To'liq Ig molekulasi kamida ikki valentli. Bunday antikorlar to'liq antikorlar deb ataladi; valentligi past bo'lgan monomerlar to'liq bo'lmagan antikorlardir.

To'liq antikorlar(xususan, IgM, IgG) yalang'och ko'z bilan ko'rinadigan Ag agregatsiyasini keltirib chiqaradi (masalan, bakteriyalarning RA).

To'liq bo'lmagan antikorlar tarkibida bitta Ag-bog'lanish markazi mavjud va shuning uchun ular bir valentli (masalan, brutsellyozda ishlab chiqarilgan antikorlar). Bunday Iglarning ikkinchi Ag bog'lash markazi turli tuzilmalar bilan himoyalangan yoki past avidlikka ega.

To'liq bo'lmagan antikorlar funktsional jihatdan nuqsonli, chunki ular Ag ni yig'a olmaydi. To'liq bo'lmagan ATlar Ag epitoplarini bog'lashi mumkin, ular bilan to'liq antikorlarning aloqa qilishiga to'sqinlik qiladi; shuning uchun ular ham deyiladi antikorlarni blokirovka qilish.

Antikorning Fc fragmenti

Og'ir zanjirlarning doimiy hududlari antikorning hujayralar va molekulalar bilan o'zaro ta'sirining tabiatini aniqlaydi immun tizimi, xususan, Ig molekulasining Fc fragmenti uchun retseptorlarni o'z yuzasida olib yuruvchi effektor hujayralar (masalan, fagotsitlar, mast hujayralari) bilan bog'lanishning o'ziga xosligi.

Fc fragmenti antikorning effektor funksiyalarini ham aniqlaydi (masalan, komplement faollashuvi). Ushbu xususiyatlarni amalga oshirish uchun Ag ning Fab fragmentlari bilan bog'langanidan so'ng darhol Fc fragmentlari tuzilishida konformatsion o'zgarishlar sodir bo'ladi. Fagotsitlar tomonidan o'zgartirilgan Fc fragmentlari komplementning C1a komponentining fiksatsiyasiga va klassik yo'l bo'ylab komplementar kaskadning boshlanishiga yordam beradi; Aks holda, na hujayralar, na effektor molekulalar buzilmagan AT va Ag ni bog'lagan antikorlarni ajrata olmaydi.

Antikorlarning antijen bilan o'zaro ta'siri o'z ichiga oladi spesifik va nospesifik fazalar.

Muayyan faza tez davom etadi va faol markazning Ag bilan o'ziga xos o'zaro ta'sirini ifodalaydi.

Nonspesifik faza sekinroq davom etadi va elektrolitlar mavjudligiga va Ag xususiyatlariga bog'liq. Korpuskulyar Aglar qoʻpol konglomeratlarga yigʻilib, choʻkma hosil qiladi (aglyutinatsiya hodisasi).

Eriydigan Aglar nozik dispersli konglomeratlarni hosil qiladi (cho'kish hodisasi), eritmaning bulutlanishi yoki yog'ingarchilik halqalari yoki jellarda yog'ingarchilik zonalarining shakllanishi bilan namoyon bo'ladi.

Yengil zanjir doimiy mintaqalarining ikki turi mavjud - kappa (k) va lambda; Og'ir zanjirlarning doimiy taqdiri beshta asosiy shakl bilan ifodalanadi - mu (p), gamma (y), delta (8), alfa (a) va epsilon (e). Ularning har biri alohida Ig sinfi bilan bog'langan. AT ning 5 klassi mavjud: IgA, IgD, IgE, IgG va IgM.

IgG, IgD va IgE molekulalari monomerlar, IgM - pentamerlar bilan ifodalanadi; Qon zardobidagi IgA molekulalari monomerlar, ajralib chiqadigan suyuqliklarda (ko'z yoshi suyuqligi, so'lak, shilliq pardalar sekretsiyasi) ular dimerlardir.

IgM Ag ning tanaga birinchi kirishi bilan sintezlanadi. Shakllanishning cho'qqisi 4-5 kunlarda sodir bo'ladi, keyin titrning pasayishi kuzatiladi. IgM ning ba'zi Aglarga (masalan, bakteriyalarning flagellar Ags) shakllanishi doimiy ravishda sodir bo'ladi. IgM gram-manfiy bakteriyalar Ag tomonidan ishlab chiqarilgan AT ning muhim qismini o'z ichiga oladi.

Muayyan patogenning Ag ga IgM mavjudligi o'tkir yuqumli jarayonni ko'rsatadi.

IgM molekulasi pentamerdir; beshta kichik birlik J zanjiri bilan bog'langan [ingliz tilidan. qo'shilish, bog'lash], buning natijasida IgM molekulasi 10 ta Ag-bog'lanish joyiga ega bo'ladi.

IgM molekulalari Ag o'z ichiga olgan tuzilmalarni opsonizatsiya qiladi, aglyutinatsiya qiladi, cho'kadi va lizi qiladi, shuningdek, klassik yo'l bo'ylab komplement tizimini faollashtiradi (bakteriyalarning komplementga bog'liq lizisi uchun bitta IgM molekulasi etarli).

Immunoglobulin G (IgG)- asosiy AT klassi (barcha Igsning 75% gacha), organizmni bakteriyalar, viruslar va toksinlardan himoya qiladi. Ag bilan dastlabki aloqadan so'ng, IgM sintezi odatda IgG shakllanishi bilan almashtiriladi.

Birlamchi javob paytida maksimal IgG titrlari 6-8 kunlarda kuzatiladi. Yuqori aniqlanish IgG titrlari Muayyan patogenning Ag ga ko'tarilishi tananing tiklanish bosqichida ekanligini yoki yaqinda o'ziga xos kasallikka chalinganligini ko'rsatadi. Ayniqsa, katta miqdorda IgG ikkilamchi javob paytida sintezlanadi.

IgG 4 ta kichik sinf bilan ifodalanadi: IgG1, IgG2, IgG3 va IgG4; ularning nisbiy tarkibi (%) mos ravishda 66-70, 23, 7-8 va 2-4 ni tashkil qiladi. IgG immun sitoliz reaktsiyalarida, neytrallanish reaktsiyalarida bevosita ishtirok etadi, shuningdek, opsoninlar vazifasini bajaradigan va fagotsitlar membranasidagi Fc fragmentlari retseptorlarini bog'laydigan fagotsitozni kuchaytiradi (buning natijasida fagotsitlar mikroorganizmlarni yanada samaraliroq singdiradi va lizlaydi).

Faqat IgG platsentaga kirishga qodir, bu homilada passiv immunitetning shakllanishini ta'minlaydi.

Immunoglobulin A (IgA) qon zardobida aylanadi (barcha Iglarning 15-20% ni tashkil qiladi), shuningdek epiteliy yuzasiga chiqariladi. Tuprikda, ko'z yoshi suyuqligida, sutda va shilliq pardalar yuzasida mavjud.

IgA toifali ATlar ovqat hazm qilish trakti, nafas olish, jinsiy va siydik yo'llarining shilliq pardalarini himoya xususiyatlarini oshiradi. Qon zardobida IgA ikki valentli monomerlar shaklida aylanadi; ajratilgan suyuqliklarda bir J-zanjir va qo'shimcha polipeptid molekulasini (epitelial hujayralar tomonidan sintez qilingan sekretor komponent) o'z ichiga olgan tetravalent dimerlar ustunlik qiladi.

Ushbu molekula IgA monomerlarini epiteliy hujayralari orqali shilliq qavatlar yuzasiga o'tkazishda birikadi. Sekretor komponent nafaqat IgA molekulalarini bog'lashda ishtirok etadi, balki ularning hujayra ichidagi tashishini va shilliq pardalar yuzasiga chiqishini ta'minlaydi, shuningdek, IgA ni proteolitik fermentlar tomonidan hazm qilishdan himoya qiladi.

IgA molekulalari patogenlarni neytrallash va aglutinatsiya reaktsiyalarida ishtirok etadi. Bundan tashqari, Ag-AT kompleksi hosil bo'lgandan so'ng, ular alternativ yo'l orqali komplementni faollashtirishda ishtirok etadilar.

Immunoglobulin E (IgE) biologik faol moddalarga ega bo'lgan ko'plab granulalarni o'z ichiga olgan mast hujayralari va bazofil leykotsitlar bilan maxsus o'zaro ta'sir qiladi. Ularning hujayradan chiqishi (degranulyatsiya) venulalar lümeninin keskin kengayishiga va ularning devorlarining o'tkazuvchanligini oshirishga olib keladi. Shunga o'xshash rasm qachon kuzatilishi mumkin allergik reaktsiyalar(Masalan, bronxial astma, allergik rinit, ürtiker).

IgE molekulasining Ag-bog'lovchi Fab bo'laklari tanaga kiradigan Ag bilan maxsus o'zaro ta'sir qiladi. Shakllangan immun kompleks bazofil yoki mast hujayraning hujayra membranasiga o'rnatilgan IgE ning Fc bo'laklari retseptorlari bilan o'zaro ta'sir qiladi. Ushbu o'zaro ta'sir gistamin va boshqa biologik faol moddalarning chiqishi va o'tkir allergik reaktsiyaning rivojlanishi bilan degranulyatsiya uchun signaldir.

Antikor Fab parchalari antijenik determinantlar bilan o'zaro ta'sir qiladi. Ag-bog'lash markazi Ag epitopini to'ldiradi (kalitlarni qulflash printsipi). Ag ning AT bilan bog'lanishi kovalent emas va teskari. Ag ning antikorlarga yaqinligi (yaqinligi). o'zaro ta'sir qiluvchi molekulalarning fizik-kimyoviy xususiyatlari va bog'langan va erkin Ag va kontsentratsiyalarining nisbati bilan aniqlanadi. antikorlar. Yaqinlikka molekulalarning o'zaro ta'sir qiluvchi mintaqalarining fazoviy mosligi, elektrostatik, hidrofobik o'zaro ta'sirlar va Van der Vaals kuchlari ta'sir qiladi.

Avidlik- barcha faol markazlarning Ag epitoplari bilan o'zaro ta'sirini hisobga olgan holda Ag va AT o'rtasidagi bog'lanish kuchining integral xarakteristikasi.

Antikor valentligi- faol (Ag bog'lovchi) markazlar soni antikorlar. To'liq Ig molekulasi kamida ikki valentli. Bunday antikorlar sifatida tanilgan to'liq antikorlar; valentligi past bo'lgan monomerlar - to'liq bo'lmagan antikorlar.

To'liq antikorlar(xususan, IgM, IgG) yalang'och ko'z bilan ko'rinadigan Ag agregatsiyasini keltirib chiqaradi (masalan, bakteriyalarning RA).

To'liq bo'lmagan antikorlar bitta Ag bog'lash markazini o'z ichiga oladi va shuning uchun bir valentli (masalan, antikorlar, brutsellyozda ishlab chiqariladi). Bunday Iglarning ikkinchi Ag bog'lash markazi turli tuzilmalar bilan himoyalangan yoki past avidlikka ega.

To'liq bo'lmagan antikorlar funktsional nuqsonli, chunki ular Ag ni yig'a olmaydi. Tugallanmagan AT Ag epitoplarini bog'lab, ular bilan aloqa qilishni oldini oladi to'liq antikorlar; shuning uchun ular ham deyiladi antikorlarni blokirovka qilish.

Antikorning Fc fragmenti

Og'ir zanjirlarning doimiy hududlari o'zaro ta'sirlarning tabiatini belgilaydi antikorlar immun tizimining hujayralari va molekulalari bilan, xususan, Ig molekulasini ularning yuzasida Fc fragmenti uchun retseptorlarni olib yuruvchi effektor hujayralar (masalan, fagotsitlar, mast hujayralari) bilan bog'lanishning o'ziga xosligi.

Fc fragmenti effektorni ham aniqlaydi antikor funktsiyalari(masalan, to'ldiruvchini faollashtirish). Ushbu xususiyatlarni amalga oshirish uchun Ag ning Fab fragmentlari bilan bog'langanidan so'ng darhol Fc fragmentlari tuzilishida konformatsion o'zgarishlar sodir bo'ladi. Fagotsitlar tomonidan o'zgartirilgan Fc fragmentlari komplementning C1a komponentining fiksatsiyasiga va klassik yo'l bo'ylab komplementar kaskadning boshlanishiga yordam beradi; Aks holda, na hujayralar, na effektor molekulalar buzilmagan AT yoki ATni ajrata olmaydi. antikorlar, bog'langan Ag.

1. Ma'ruza mavzusi:“B-limfotsitlarning gumoral immunitet tizimi. Immunoglobulin G ning tuzilishi

2. Maqsad: Talabalarni B-immun tizimining asosiy funktsiyalari bilan tanishtirish uchun B-limfotsitlar differentsiatsiyasining asosiy bosqichlarini, immunoglobulin G ning tuzilishi va funktsiyalarini ko'rib chiqing.

3. Ma’ruza tezislari:

B-tizimining asosiy funktsiyalari.

Immunoglobulin G ning kimyoviy tuzilishi.

Immunoglobulinlarning Fab va Fc fragmentlarining vazifalari

Gumoral immunitet tizimi ixtisoslashgan tizim bo'lib, uning asosiy vazifasi antijenlarga qarshi antikorlarni sintez qilishdir. Gumoral immun tizimining funksional faolligi ko'p hollarda T-immun tizimi va antigen taqdim qiluvchi hujayralar bilan yaqin o'zaro ta'sirga bog'liq.

Gumoral immunitet tizimining asosiy hujayralari antikorlarning sintezi uchun mas'ul bo'lgan B limfotsitlaridir. Gumoral immun javobni amalga oshirishda antikorlarning ishtiroki eruvchan va korpuskulyar antigenlar bilan immun komplekslarning shakllanishi bilan bog'liq. Immunitet komplekslarining bir qismi sifatida antijenler ajratiladi va / yoki yo'q qilinadi.

Antikorlarning asosiy vazifasi o'ziga xos antijen bilan bog'lanishdir. Antigenlar va antikorlarning o'ziga xos o'zaro ta'siri ular o'rtasida mavjud bo'lgan fazoviy muvofiqlik yoki komplementarlikka asoslanadi.

IgG molekulasida 4 ta polipeptid zanjiri mavjud: 2 ta og'ir va 2 ta engil. V-domenlarining gipervariable mintaqasi deb ataladigan aminokislotalar antigen bilan bevosita aloqada bo'ladi. Faol markaz bo'shlig'i og'ir va engil zanjirlarning o'zgaruvchan hududlari orasida joylashgan bo'lib, shakli ma'lum bir hapten guruhiga to'liq mos keladi. Ikkala og'ir zanjirning (2 CH 2 va 2 CH 3) doimiy domenlarini o'z ichiga olgan fragment Fc fragmenti deb ataladi.

Fab va Fc fragmentlarining asosiy vazifalari

Fab fragmentining asosiy vazifasi antigen bilan bog'lanishdir , chunki u og'ir va engil zanjirlarning V H va V L domenlari tomonidan hosil qilingan immunoglobulin molekulasining faol antigen bog'lash markazini o'z ichiga oladi.

Fc fragmentining funktsiyalari:

1. Immunoglobulinlarning turli sinflari Fc fragmentlari tuzilishida farqlanadi. Bu farqlar Fc fragmentlariga kiritilgan CH domenlari soniga ham, ularning aminokislotalar tarkibiga ham tegishli bo'lishi mumkin (qo'shimcha domenlar bo'lishi mumkin, masalan, IgM va IgEda CH 4). Fc fragmentlari tuzilishidagi farqlar tufayli immunoglobulinlar sinflari ham funktsiyalari bilan farqlanadi.

2. Fc fragmentlari yordamida immunoglobulin molekulalarining polimerizatsiyasi sodir bo'ladi. Masalan, sekretor IgA dimer va trimerlarni hosil qiladi, sarum IgM pentamerdir.

3. IgM, IgG ning Fc fragmentlarida 1 va IgG 3 antigen bilan bog'langanda strukturaviy o'zgarish sodir bo'ladi, buning natijasida CH 2 domeni hududida komplement tizimining birinchi komponentini bog'laydigan faol joy paydo bo'ladi, shuning uchun odamlarda immunoglobulinlarning bu sinflari klassik yo'l orqali komplement tizimining faollashishiga olib keladi.

4. Fc fragmentlari yordamida immunoglobulin molekulalari B limfotsitlarining plazma membranasiga integratsiya qilinadi va antigenni aniqlash retseptorlari hisoblanadi..

5. Tana yuzasida ko'plab hujayralar mavjud Immunoglobulinlarning turli sinflari uchun Fc retseptorlari. Agar ushbu retseptorlarga tegishli immunoglobulinlar yoki ushbu immunoglobulinlarni o'z ichiga olgan immun komplekslari biriktirilgan bo'lsa, u holda Ushbu retseptorlar orqali tegishli hujayralarning funktsiyalarini faollashtirish yoki bostirish mumkin .

4. Tasviriy material: multimedia ma'ruzasi № 2

Fab fragmenti (lot. fragmentum parcha, parcha)

immunoglobulin molekulasining bir qismi, papain tomonidan yorilib, engil zanjir va og'ir zanjirning amino-terminal yarmidan iborat; antideterminantni tashiydi.

1. Kichik tibbiy ensiklopediya. - M.: Tibbiy ensiklopediya. 1991-96 yillar 2. Birinchi tibbiy yordam. - M.: Buyuk rus entsiklopediyasi. 1994 3. Tibbiyot atamalarining entsiklopedik lug'ati. - M.: Sovet Entsiklopediyasi. - 1982-1984 yillar.

Boshqa lug'atlarda "Fab fragmenti" nima ekanligini ko'ring:

- ... Vikipediya

Ushbu maqola immunologiya haqida. Ukraina pop-rok guruhi uchun Antikorlar (guruh) ga qarang; film uchun Antikorlar (film, 2005) ga qarang. Antikorlar (immunoglobulinlar, IG, Ig) glikoproteinlarning maxsus sinfidir ... ... Vikipediya.

- (Ig), kimyoviy jihatdan bog'liq bo'lganlar guruhi. odatda antikorlarga ega bo'lgan umurtqali hayvonlar va odamlarning globulyar oqsillarining tabiati va xususiyatlari, ya'ni o'ziga xos. ularning shakllanishini rag'batlantiradigan antigen bilan bog'lanish qobiliyati. I. ishlab chiqariladi....... Kimyoviy ensiklopediya

I Antikorlar - bu qon zardobidagi va boshqa biologik suyuqliklardagi oqsillar bo'lib, ular antigenning kiritilishiga javoban sintezlanadi va ularning shakllanishiga sabab bo'lgan antijen bilan yoki ajratilgan determinant bilan maxsus ta'sir o'tkazish qobiliyatiga ega ... Tibbiy ensiklopediya

Immunoglobulinlar guruhining oqsillari, inson va issiq qonli hayvonlar organizmida moddalar (antijenler) kirib kelishiga javoban va ularning zararli ta'sirini zararsizlantiradi. A. faoliyati namoyon boʻlishining asosiy shakllari aglyutinatsiya, yogʻingarchilik,... ... Mikrobiologiya lug'ati

Faol modda ›› Abciximab* (Abciximab*) Lotin nomi ReoPro ATX: ›› B01AC13 Abciximab Farmakologik guruhi: Antiplatelet agentlari Nozologik tasnif (ICD 10) ›› I20 Angina [angina pektoris] ›› I20.0 Beqaror… … Dori-darmonlar lug'ati

JON- [yunoncha pskk] tana bilan birgalikda shaxs tarkibini tashkil qiladi (qarang: Dixotomizm, Antropologiya maqolalari), shu bilan birga mustaqil tamoyil; Inson surati Xudoning suratini o'z ichiga oladi (ba'zi cherkov otalarining fikriga ko'ra, boshqalarga ko'ra, Xudoning surati hamma narsada mavjud ... ... Pravoslav entsiklopediyasi

- (Apollon, Bellun). Quyosh xudosi, Zevs va Letoning o'g'li (Latona), Artemida ma'budasining egizak ukasi. Apollon, shuningdek, musiqa va san'at xudosi, fol ochish xudosi va podalar va chorva mollarining homiysi hisoblangan. U shaharlar va hukumatlar barpo etishda faol ishtirok etadi... Mifologiya entsiklopediyasi

BUYUK DIONISIY- [yunoncha Dionosos ὁ Ligas] (II asr oxiri 264/5), Sankt, ispan. (5 oktyabr yodgorligi, 3 oktyabr yunon yodgorligi), episkop. Aleksandriy, ilohiyotchi, cherkov jamoat arbobi. Hayot D.V. tarjimai holining asosiy manbai Kesariyalik Evseviyning yozuvlaridir... ... Pravoslav entsiklopediyasi

- (Aktaeon, Chináîn). Mashhur ovchi, Aristey va Avtoniyaning o'g'li. Bir marta ov paytida u Artemidani cho'milayotganini va uning nimfalarini ko'rdi, buning uchun ma'buda uni kiyikga aylantirdi va 50 ta iti uni parchalab tashladi. Boshqa bir afsonaga ko'ra, Artemida uni kiyikga aylantirgan ... ... Mifologiya entsiklopediyasi

- (θēēĬ), yunon mifologiyasida, donolik va adolatli urush ma'budasi. A. obrazining yunongacha boʻlganligi maʼbuda nomining etimologiyasini faqat maʼlumotlar asosida ochib berishga imkon bermaydi. yunon tili. Zevs va Metisdan A.ning tug'ilishi haqidagi afsona («donolik», ... ... Mifologiya entsiklopediyasi

UDC 577.322.24

D. O. Dormeshkin, magistratura talabasi (BSTU);

V. N. Leontiev, kimyo fanlari nomzodi, dotsent, kafedra mudiri (BSTU);

I. G. Ivashkevich, kimyo fanlari nomzodi (Belorussiya IBOC NAS);

A. A. Gilep, kimyo fanlari nomzodi, laboratoriya mudiri (IBOC Belarusiya NAS)

KORTIZOLGA MAXSUS ANTIJALARNING REKOMBINANT FAB FRAGMENTLARINI OLISH

Ushbu ishda steroid gormoni kortizolni maxsus bog'laydigan sichqoncha immunoglobulinlari tuzilishini kodlovchi genlarni molekulyar klonlash amalga oshirildi. Shu maqsadda primerlar Escherichia coli hujayralarida rekombinant antikorlarni samarali ifodalash uchun G sinfidagi immunoglobulinlarning tuzilishini kodlovchi genlarning butun oilasini qamrab olish uchun mo'ljallangan. Antikorlarning Fab fragmentlarining heterologik ifodasi amalga oshirildi. Rekombinant oqsil bir hil holatda olinadi.

Maqolada sichqoncha immunoglobulinlarining strukturasini kodlovchi genlarning molekulyar klonlanishi haqida so‘z boradi, ular steroid gormoni kortizolni maxsus bog‘lashi mumkin. Shu maqsadda G immunoglobulinlarining tuzilishini kodlaydigan genlarning barcha oilalarini qamrab oluvchi primerlar va ichak tayoqchasida rekombinant antikorlarni samarali ifodalash uchun molekulyar-genetik konstruktsiyalar yaratilgan. Fab-fragmentlarning geterologik ifodasi amalga oshirildi. Rekombinant oqsil gomogen holatda ajratilgan.

Kirish. Kortizol (1-rasm) eng muhim steroid gormonlaridan biri bo'lib, tananing ko'plab funktsiyalarini saqlab turish uchun zarurdir. Boshqa glyukokortikosteroidlar singari, kortizol ham buyrak usti bezlari po‘stlog‘ining fassikulata zonasida umumiy xolesterindan sintezlanadi. Qondagi steroid gormon kortizol darajasini o'lchash gipofiz bezi va buyrak usti bezlari po'stlog'ining faoliyatini kuzatish uchun katta ahamiyatga ega. Hozirgi vaqtda biologik suyuqliklarda kortizol miqdorini aniqlash uchun juda ko'p diagnostika tizimlari mavjud. Ularning aksariyati u yoki bu tarzda kortizolning tegishli antikorlar (immunoglobulinlar) tomonidan yaqinligini aniqlash printsipidan foydalanadi. Tezkor vazifa diagnostika tizimlarini tanib olish modulining funktsional xususiyatlarini yaxshilash, shuningdek ularning narxini pasaytirishdir. Ushbu muammoni hal qilishning mumkin bo'lgan usullaridan biri ko'proq bo'lgan rekombinant antikorlardan foydalanishdir keng to'liq uzunlikdagi antikorlar bilan solishtirganda xususiyatlar.

Guruch. 1. Kortizolning struktur formulasi

Immunoglobulinlar - qon plazmasida mavjud bo'lgan glikoproteinlar oilasi va

umurtqali hayvonlarning tanaga begona moddalarni (antijenlarni) tanib olish va bog'lash qobiliyatiga ega bo'lgan to'qimalar suyuqliklari. Antigenning antikor ta'sir qiladigan hududi epitop, antigen bilan o'zaro ta'sir qiladigan qismi esa paratop deb ataladi.

Yuqori sutemizuvchilarda immunoglobulinlar beshta sinf bilan ifodalanadi: IgO, IgM, IgA, IgE va IgB. Eng ko'p amaliy qiziqish uyg'otadigan eng keng tarqalgan sinf - ^O, inson tanasida to'rtta kichik sinf (izotiplar) bilan ifodalanadi: ^1, ^2, DOZ va ^4.

Immunoglobulin ikkita bir xil og'ir zanjir va ikkita engil zanjirdan tashkil topgan multimerik oqsildir (2-rasm).

Og'ir zanjir Yengil zanjir

Guruch. 2. Immunoglobulin molekulasining tuzilishi

232 ISSN 1683-0377. BSTU materiallari. 2013. No 4. Kimyo, texnologiya organik moddalar va biotexnologiya

Immunoglobulin molekulasini shartli ravishda ikkita funktsional sub birlikka bo'lish mumkin - Fab fragmenti (fragment-antigen bog'lovchi) va Fc fragmenti (fragment kristallanishi mumkin). Fc fragmenti ikki juft doimiy domenlardan (CH2 va CH3) iborat bo'lib, immunitet reaktsiyasini faollashtirishda hujayra retseptorlari bilan, shuningdek, komplement tizimining oqsillari bilan o'zaro ta'sir qilish uchun javobgardir. Fab fragmenti antigenni tanib olishda ishtirok etadi va bir o'zgaruvchan mintaqadan (VL va VH) va bitta doimiy mintaqadan (CL va CH1) iborat. Alohida polipeptid zanjirlari bir-biri bilan disulfid bog'lari va kovalent bo'lmagan o'zaro ta'sirlar orqali bog'langan. Bundan tashqari, CH2 mintaqasi darajasida molekula glikozillanadi.

Molekulyar genetik texnologiyalarning rivojlanishi bilan mini-antikorlar keng tarqaldi: antijenni maxsus bog'lashga qodir bo'lgan, ammo to'liq o'lchamdagidan ko'ra ko'proq kirib borish qobiliyatiga ega bo'lgan Fab- (fragment antigenini bog'lash) va scFv- (bitta zanjirli fragment o'zgaruvchan) fragmentlari. antikorlar. Fab fragmenti og'ir zanjirli hududdan (VH va CH1) va disulfid aloqalari va kovalent bo'lmagan o'zaro ta'sirlar bilan bog'langan engil zanjirdan tashkil topgan 50 kDa oqsildir. Peptid bog'lovchisi bilan bog'langan faqat o'zgaruvchan hududlardan (VH va VL) tashkil topgan fragment scFv fragmenti bo'lib, molekulyar og'irligi 15 kDa ni tashkil qiladi. Rekombinant mini-antikorlar bakterial ekspresyon tizimida ishlab chiqarilishi mumkin, to'liq uzunlikdagi immunoglobulinlardan farqli o'laroq, Fc domeni glikosillangan va shunga mos ravishda translatsiyadan keyingi modifikatsiya tizimlarini talab qiladi. Antikor fragmentlarining tuzilishi va shunga mos ravishda fizik-kimyoviy xususiyatlarini gen darajasida boshqarish oson va ular effektor funktsiyalarini olish uchun to'liq uzunlikdagi antikorlarga aylantirilishi mumkin.

Asosiy qism. Asosiy maqsad kortizol steroid gormoniga antikorlarning yuqori afinitetli Fab fragmentlarini olish edi.

5G-H2 gibridomalari tomonidan ishlab chiqarilgan monoklonal antikorlar (Belarus Milliy fanlar akademiyasining Bioorganik kimyo institutining oqsil gormonlari kimyosi laboratoriyasida olingan) kortizol steroid gormoni bilan maxsus bog'lanishga qodir. Shu bilan birga, monoklonal antikorlarni ishlab chiqaradigan gibridoma liniyalaridan foydalanish bir qator muhim kamchiliklarga ega, ular orasida hujayra liniyalarining beqarorligi, etishtirishning yuqori narxi va immunoglobulin genlari bilan genetik muhandislik manipulyatsiyasini amalga oshirishning mumkin emasligi kiradi. Bundan tashqari, olingan

Gibridoma texnologiyasidan foydalangan holda antikorlar sichqoncha immunoglobulinlarining aralashmalarini o'z ichiga olishi mumkin, bu diagnostika tizimlarida qo'llanilganda noto'g'ri natijalar ehtimolini oshiradi. Bu cheklovlarning barchasini genetik muhandislik usullari yordamida olingan va bakterial tizimda ifodalangan rekombinant antikorlar yordamida bartaraf etish mumkin.

Birinchi qadam kortizol steroid gormoniga xos antikorlarni ishlab chiqaradigan 5G-H2 gibridomalaridan umumiy RNKni ajratish edi. Jami RNK SV Total RNK izolyatsiyasi to'plami (Promega) yordamida ajratildi va cDNA (Rospotrebnadzor Markaziy Epidemiologiya ilmiy-tadqiqot institutining Reverta-L reaktiv to'plami) olish uchun oligo-IgT)18 primerlari bilan teskari transkripsiya reaktsiyasini amalga oshirish uchun darhol foydalanildi. ishlatilgan).

Olingan cDNK immunoglobulinlarning og'ir va engil zanjirlari tuzilmalarini kodlovchi genlarni kuchaytirish uchun shablon sifatida ishlatilgan. Adabiyot ma'lumotlari va IMGT.org ma'lumotlar bazasidan olingan immunoglobulinlarning nukleotidlar ketma-ketligini tahlil qilish asosida o'ziga xos degenerativ primerlar sichqoncha immunoglobulinlarining G sinfining engil va og'ir zanjirlarini kodlaydigan cDNK genlarining butun xilma-xilligini qamrab olish uchun ishlab chiqilgan. Kuchaytirish BioRad T100 kuchaytirgichida quyidagi sharoitlarda amalga oshirildi: denatürasyon 94°C 4 daqiqa; 30 tsikl - 1 daqiqa davomida 94 ° C denaturatsiya, 1 daqiqa davomida 55 ° C tavlanish, 1 daqiqa davomida cho'zish 72 ° C. Yakuniy bosqich cho'zilish -72 ° C 10 min.

Kuchaytirilgan fragmentlar etidiy bromid ishtirokida TAE buferidan foydalangan holda 2% agaroz jelida gel elektroforez bilan ajratildi (natijalar Gel Imager 2 video tizimi (Vilber Lourmat) yordamida qayd etilgan). Har bir holatda, ijobiy va salbiy kuchaytirish nazorati amalga oshirildi.

PCRdan so'ng, kuchaytirish mahsulotlari pXcmkn12 vektoriga klonlandi va klonlangan DNKning to'g'ri ketma-ketligini tasdiqlash uchun ketma-ketlashtirildi (nukleotidlar ketma-ketligi ABI PRISM BigDye Terminator v3.1 Ready Reaction Cycler Sequencing Kit, Big Dye X Terminator Purification Kit yordamida aniqlandi. va Amaliy biotizimlar sekvenseri 3130). Sekvensiyalash shuni ko'rsatdiki, klonlangan og'ir zanjir G2a tipidagi bo'lib, bu gibridoma tomonidan ishlab chiqarilgan antikorlar izotipiga mos keladi va engil zanjir k tipiga ega.

Antikorlarning Fab bo'laklarini ifodalash uchun maxsus mo'ljallangan

plazmid vektor pCW-Fab, ta'minlash yuqori daraja Escherichia coli periplazmik bo'shlig'ida rekombinant antikorlarning ifodalanishi.

Preparatni ifodalash uchun klonlangan Fab domen genlarini o'z ichiga olgan bicistronic vektor pCW-Fab bilan o'zgartirilgan E. coli DH5a hujayralari ishlatilgan.

E. coli DH5a hujayralarini kultivatsiya sil kasalligi muhitida amalga oshirildi. Hujayra madaniyatini oqsil sinteziga kiritish IPTG (izopropil^^-1-tiogalakto-piranozid) yordamida amalga oshirildi, bu laktoza operonining induksiyasi orqali transkripsiyani ishga tushiradi.

Hujayralar detarjan (CHAPS), serin proteaz inhibitori (PMSF) va ß-merkaptoetanol qo'shilgan Emulsiflex-C5 gomogenizatori yordamida yo'q qilindi. Vayron qilingan hujayralar santrifüj orqali ajratildi. Supernatant ProteinA Sepharose bilan xromatografik ustunga surildi. ProteinA - bu Staphylococcus aureus hujayralarida ifodalangan va og'ir immunoglobulinlar zanjirining CH1 domenini bog'lash qobiliyatiga ega bo'lgan oqsil, bu rekombinant Fab fragmentlarini (Bio-Rad "Bio-Logic" oqsil izolatsiyasi) ajratish uchun yaqinlik xromatografiyasidan foydalanishga imkon beradi. va tozalash tizimi ishlatilgan).

Olingan oqsilning bir xilligi denaturatsiya sharoitida PAGE elektroforezi yordamida nazorat qilindi, bu kutilgan molekulyar og'irlikdagi ikkita polipeptid zanjirining mavjudligini ko'rsatdi, bu yaratilgan konstruktsiyalarning samaradorligini tasdiqlaydi. Antikorlarning rekombinant Fab fragmentlarining funktsional faolligi qo'shimcha o'rganishni talab qiladi.

Xulosa. Kortizolga xos sichqoncha immunoglobulinlarining tuzilishini kodlovchi genlarni molekulyar klonlash amalga oshirildi. Sekvensiya natijalari klonlangan fragmentlar immunoglobulinlar sinfiga tegishli ekanligini tasdiqladi. Yaratilgan molekulyar genetik konstruktsiyalar E. coli hujayralarida rekombinant Fab fragmentlarining geterologik ifodasini amalga oshirish imkonini berdi. Rekombinant oqsil kutilganlarga mos keladigan molekulyar og'irlikdagi bir hil holatda olindi. Olingan antikor Fab fragmentlarining xususiyatlari qo'shimcha o'rganishni talab qiladi.

Mualliflar jamoasi Protein gormonlari kimyosi laboratoriyasiga va shaxsan kimyo fanlari doktori O. V. Sviridov va kimyo fanlari nomzodi Ivashkevich I. G.ga 5G-H2 gibridoma hujayralarini mehr bilan ta'minlaganliklari uchun o'z minnatdorchiligini bildiradi.

Adabiyot

1. Spironelli, C. Ona filitsidlari va zo'ravon psixiatrik ayollarda kortizol va ACTH plazma darajalari / C. Spironelli, F. J. Gradante // Psixiatr Res. - 2013. - jild. 47. - B. 622-627.

2. Ivanov, V. T. Immunitet tizimining oqsillari. darslik nafaqa / V. T. Ivanov; nomidagi Bioorganik kimyo instituti. M. M. Shemyakina. -M.: IBXRAN, 1997. - 114 b.

3. Buchner, J. Escherichia coli / J. Buchner, R. Rudolph // Biotexnologiya (NY) da ishlab chiqarilgan rekombinant Fab-fragmentlarning renaturatsiyasi, tozalanishi va tavsifi. - 1991. - jild. 9 (2). -B.157-162.

4. Ahmad, Z. A. scFv Antikor: printsiplari va klinik qo'llanilishi / Z. A. Ahmad, S. K. Yeap, M. Hamid // Klinik va rivojlanish immunologiyasi. - 2012. - jild. 2012. - B. 3-17.

5. Dimitrov, D. S. Terapevtik antikorlar: hozirgi holat va kelajakdagi tendentsiyalar - tez orada paradigma o'zgarishi bormi? / D. S. Dimitrov, J. D. Marks // Molekulyar biologiyada usullar. - 2009. - jild. 525. -P. 1-27

6. Jez, J. Yagona N-Gly-kon qoldiqlarining Fc-asosidagi antikorga o'xshash fragmentlarning biologik faolligiga sezilarli ta'siri / J. Jez, A. Castilho, H. Steinkellner // Biologik kimyo jurnali. - 2012. - jild. 29. - P. 24313-24319.

7. Strebe, N. Sichqoncha gibridomasidan o'zgaruvchan domenlarni PCR orqali klonlash / N. Strebe, D. Moosmayer, S. Dubel // Antikor muhandisligi. -2010. - jild. 1. - B. 3-14.

8. Rohatgi, S. Kichik miqdordagi B-hujayralaridan sichqonchani qayta tashkil etilgan / ifodalangan immun-noglobulin o'zgaruvchan mintaqa genlarini o'ziga xos kuchaytirish uchun ichki (RT-) PCR primerlarini tizimli loyihalash va sinovdan o'tkazish / S. Rohatgi, P. Ganju, D. Sehgal // Immunologik usullar jurnali. - 2008. - jild. 330. - B. 205-219.